卵巢癌是妇科最常见的三大恶性肿瘤之一，具有较高的发病率和死亡率[1].由于其发病隐匿，潜伏期无特异的临床症状且目前缺乏针对早期卵巢癌可靠的筛查手段等诸多因素，导致多数患者确诊时已是中晚期，严重危害妇女的健康和生命[2-3].
分子生物学、免疫学、病毒学和基因工程等基础学科的飞速发展，为卵巢癌的生物治疗创造了条件[4].研究发现，肿瘤微环境中，有多种免疫细胞募集、参与肿瘤免疫，其中数量最为丰富的是肿瘤相关巨噬细胞（tumor-associated macrophages,TAM）[5-7].鉴于此，本研究探讨了 TAM 与卵巢癌组织之间的关系以及对预后的影响，旨在为卵巢癌的早期诊断、预后评估及临床控制肿瘤提供新的方向，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
收集 2010 年 11 月~ 2016 年 7 月我院手术切除、病例确诊并有完整临床资料的卵巢癌组织标本 250 例，年 龄 45 ~ 71 岁，平 均（60.8±5.6）岁；FIGO 分期Ⅰ~Ⅱ期 89 例，Ⅲ~Ⅳ期 161 例。所有患者均为初诊患者，术前为进行任何放、化疗及分子靶向治疗等，无其他免疫系统疾病。所有病例均有随访，随访时间从术后开始，随访期限到 2016 年10 月，最长随访时间 5 年，平均（2.41±1.38）年；随访方式为电话随访结合返院门诊复查。计算无进展生存时间（progression free survival,PFS）及总生存时间（overall survival,OS）。随访期间患者死亡指因肿瘤复发或转移引起的死亡，其他疾病、意外死亡不计入内。
1.2 方法
1.2.1 卵巢癌组织切片的制作？ 包埋好的组织蜡块用自动切片机按常规切成 4μm 薄片，平放于 40℃温水中，待其充分展开后，用多聚赖氨酸处理的载玻片捞取，并使其充分贴附平铺，然后置入60℃烤箱，烘烤 2h,使组织薄片上的石蜡融化，水分蒸发。
1.2.2 免疫组化染色？ 采用免疫组织化学方法（SP 法）检测 TAM 特异性单克隆抗体 CD68 在卵巢癌组织中的表达量，具体方法为：组织切片二甲苯脱蜡，梯度酒精水化；3% 过氧化氢阻断内源性过氧化物酶；微波抗原修复；羊血清室温封闭 2h 后，加一抗 4℃冰箱过夜；PBS 洗涤后，加二抗 37℃孵育20min;DAB 显色，苏木精复染，梯度酒精脱水，二甲苯透明后封片。以 PBS 代替一抗作为阴性对照。
结果判读：CD68 阳性细胞浆为黄褐色或棕褐色颗粒，表达于巨噬细胞质内；先在低倍（100 倍）光学显微镜下观察整张切片，选取 5 个具有代表性的表达区域，在高倍镜（400 倍）下进行阳性细胞计数，计数后取平均值。
1.3 统计学处理
采用 SPSS 21.0 软件对数据进行统计分析，其中计量资料以（x±s）的形式表示，计数资料以率（%）的形式表示，分别进行 t 检验和 χ2检验；CD68 表达量与卵巢癌病理参数之间的相关性采用Spearman 相关分析。P < 0.05 表示差异有统计学意义。
2 结果
2.1 TAM密度与卵巢癌临床病理参数的关系
250 例卵巢癌病理切片中，CD68 计数 3 ~ 117/HP,中位数 51.46/HP.以中位数为界，将病例分为低表达区和高表达区，低表达组 113 例，CD68 平均数为（32.24±4.18）/HP;高表达组 137 例，CD68 平均数为（76.16±6.03）/HP.两组临床病理参数如表 1 所示。CD68 表达量与卵巢癌 FIGO 分期和淋巴结转移具有相关性（P < 0.05），与年龄、肿瘤大小、分化程度、组织学类型、远处转移和浸润深度无关（P > 0.05），见表 1.Spearman 相关分析显示，淋巴结转移与 CD68 表达量呈正相关（r=0.742,P < 0.05）。
2.2 CD68表达量与卵巢癌患者预后的相关性
高表达组PFS、OS均显著低于低表达组（P<0.05），见表 2.
3 讨论
卵巢癌是妇科常见生殖器肿瘤之一，也是人类恶性程度最高的肿瘤之一，其发病率仅次于宫颈癌和宫体癌位居第三位，但死亡率却高居首位[8].卵巢癌起病隐匿，进展快。临床研究显示，诊断为卵巢癌的患者中，75% 是手术无法救治的晚期，患者5 年生存率只有 30% 左右[9].卵巢癌细胞在腹腔内的广泛侵袭、转移是导致患者预后差的重要原因，其中淋巴转移是卵巢癌的重要转移方式之一[10].巨噬细胞是人体内重要的炎症和免疫细胞，主要来源于髓源抑制细胞，已有报道证实，TAM 的浸润在不同肿瘤微环境中的分布、密度与恶性肿瘤侵袭、转移及患者的预后有关[11].研究发现 TAM 在局部微环境作用下可产生和释放生长因子、细胞因子和趋化因子参与肿瘤微血管、微淋巴管生成、基质建设，发挥免疫抑制、逃逸等作用，从而促进肿瘤发展、转移[12-13].本研究结果显示，TAM 特异性分子标志物 CD68 表达量与卵巢癌 FIGO 分期和淋巴结转移具有相关性（P < 0.05），Spearman 相关分析显示，淋巴结转移与 CD68 表达量呈正相关（P< 0.05），同时发现，高表达组 PFS、OS 均显著低于低表达组（P < 0.05）。此结果与在多种实体瘤中的研究结果一致，其机制可能有[14-16]:（1）TAM 通过与肿瘤细胞复杂的相互作用后被激活，参与血管活性因子的作用过程，在肿瘤周边区域生成新生血管，加速肿瘤进展和转移；（2）肿瘤细胞向外浸润时，会出现以 TAM 为主的炎症细胞募集，而 TAM可通过产生蛋白酶降解基底膜，为肿瘤细胞进入间质创造了条件；（3）TAM 及其他的一些免疫细胞产生的一些细胞因子以及活性氧和氮类物质形成的亚硝酸盐，可通过影响上皮及周围细胞的 DNA 导致其基因突变以及染色体异常，引起癌症的发生。
综上所述，TAM 水平在卵巢癌淋巴结转移及患者预后中发挥重要作用。因此，对卵巢癌患者术后病灶组织标本进行 TAM 计数分析，可更好地评估预后，指导临床治疗。
[参考文献]
[1] 杨海坤，吴成勇 .CRP 与 CA125 联合阴道彩超检查在卵巢癌与卵巢子宫内膜异位囊肿鉴别诊断中的临床应用 [J]. 中国医药科学，2015,5（14）：75-77.
[2] 刘君，宋静慧，杨有莲 . 联合检测肿瘤标志物在卵巢癌中的应用 [J]. 医学综述，2012,18（6）：871-873.
[3] Lamberti I,Scarano S,Esposito CL,et al.In vitro selectionof RNA aptamers against CA125 tumor marker in ovariancancer and its study by optical biosensing[J].Methods,2015,97:58-68.
[4] 刘静 . 卵巢癌基因治疗的研究进展 [J]. 中国医药指南，2014,12（28）：83-83.
[5] 吴婷，周武雄 . 肿瘤微环境中肿瘤相关巨噬细胞的研究进展 [J]. 细胞与分子免疫学杂志，2016,32（2）：265-267.
[6] 何林燕，高锋 . 肿瘤相关巨噬细胞及其在肿瘤中的作用 [J]. 现代免疫学，2014,34（1）：85-88.
[7] Noy R,Pollard JW.Tumor-associated macrophages: frommechanisms to therapy[J].Immunity,2014,41（1）49-61.
[8] 辛亚兰，王卡娜，何荣霞 . 血清肿瘤标志物在上皮性卵巢癌早期诊断中研究进展 [J]. 中国妇幼保健，2011,26（10）1575-1578.
[9] 马勤，张易 . 晚期卵巢癌患者膈肌病灶切除术围手术期护理 [J]. 上海护理，2016,16（5）：55-58.
[10] 邱慧玲 . 肿瘤干细胞促卵巢癌淋巴管生成及转移的作用及机制研究 [D]. 重庆：第三军医大学，2013:45-47.
[11] 张志鹏 . 肿瘤相关巨噬细胞的研究进展 [J]. 泌尿外科杂志（电子版），2012,4（1）：37-40.
[12] 张国良，高锋 . 肿瘤相关巨噬细胞的形成及其与肿瘤微环境的关系 [J]. 医学分子生物学杂志，2013,10（5）：285-289.
[13] 张洪秀，陈燕 . 极化型肿瘤相关巨噬细胞及其与卵巢癌的相关性 [J]. 国际妇产科学杂志，2013,40（2）：152-155.
[14] 黄福海，潘丽英，徐楚燕 . 肿瘤相关巨噬细胞与卵巢癌组织之间的关系及预后的影响 [J]. 中国医药科学，2016,6（5）：166-168.
[15] Zhang M,He Y,Sun X,et al.A high M1/M2 ratioof tumor-associated macrophages is associated withextended survival in ovarian cancer patients[J].Journal ofOvarian Research,2014,7（1）：19.
http://m.rjdtv.com/yixuelunwen/2334.html
