人乳头瘤病毒( HPV) 与宫颈癌以及宫颈上皮样瘤变( CIN) 发生存在密切关联性，而依照致瘤性差异可将其分为低危以及高危两种，分别有一定几率引发良性肿瘤以及恶性肿瘤［1］。本文基于此探讨多重实时 PCR 技术对高危型人乳头瘤病毒感染检测的临床意义，以为临床指导。现报告如下:
1、资料与方法
1． 1、一般资料 焦作市妇幼保健院 2012 年 7 月—2013 年 12 月期间疑似宫颈病变以及感染 HPV 病例120 例，年龄 28 ～ 71 岁，平均( 41. 2 ± 6. 7) 岁。检查开始前3d 内禁用阴道内药物以及阴道冲洗; 检查时间均避开经期，同时24h 内禁性行为。
1． 2、方法 ①HC2 检测法: 检测系统由美国 Di-gene 公司提供，检测项目涉及 13 种高危型 HPVDNA，阳性评定标准［2］如下: 待测样本相对光单位( RLU) 与标准阳性对照 RLU 比值超出标准参考值，即当样本 RLU/标准阳性对照 RLU ＞ 1. 0 则可判定为阳性。②多重实时 PCR 检测法: 本次所用仪器为德国生产的 ABI7300 荧光定量基因扩增仪，所用检测试剂提供方均为上海蓝基生物有限公司。对 13 种高危型 HPV DNA 进行检测，并抽取 HC2 检测样本，将其酸碱值调至 7. 4，取 HC2 待测样本 2 ml 与 PCR 反应液混合均匀，然后通过荧光定量 PCR 仪器进行扩增，阳性评定标准［3］如下:样本循环阈值低于 37 即可判定为阳性。
1． 3、观察指标 统计多重实时 PCR、HC2 法检测高危型 HPV 以及 亚型感染情况。
1． 4、统计学分析 采用 SPSS16. 0 软件，计量资料以( x珋 ± s) 表示，计量资料的对比采用 t 检验。计数资料以百分比表示并应用 χ2检验，P ＜ 0. 05 为差异具有统计学意义。
2、结 果
2． 1、高危型 HPV 检测结果对比 在检测高危型HPV 方面，本次研究所用两种检测方法效能近似，差异并无统计学意义( P ＞0. 05) ; 与湿疣以及宫颈炎相比，多重实时 PCR 在鳞状细胞癌、低度鳞状上皮内病变( LSIL) 以及高度鳞状上皮内病变( HSIL)阳性检出率更高，差异具有统计学意义 ( P ＜0. 05) ; 与湿疣以及宫颈炎相比，HC2 检测法在鳞状细胞癌、LSIL 以及 HSIL 阳性检出率更高，差异具有统计学意义( P ＜0. 05) ，见表 1。
表 1 两种方法检测高危型 HPV 结果对比( n，%)
2． 2、多重实时 PCR 检测高危型 HPV 亚型感染结果 120 例患者，PCR 检测阳性率为 84. 2% ( 101/120) ，其中 26 例为 16 型，占 25. 7% ; 21 例为 18型，占 20. 8%; 10 例为 31 型，占 9. 9%; 5 例为 33型，占 5. 0%; 10 例为 45 型，占 9. 9%; 4 例为 52型，占 4. 0%; 4 例为 56 型，占 4. 0%; 21 例为 58型，占 20. 8%。16 型、18 型以及 58 型感染率更高，与其他亚型感染率相比差异具有统计学意义( P ＜0. 05) 。
3、讨 论
多重实时 PCR 检测技术以一项以核酸杂交为基础，并被广泛应用于 mRNA 检测的基因技术，可有效减少聚合酶链式反应后的相关操作，同时在浓度不同的 mRNA 对比方面具有较高的动力学优势［4］。实时荧光定量 PCR 则是将探针或者染料等荧光基团加入 PCR 反应体系，通过荧光信号积累来对 PCR 整体进程进行实时监测，DNA 双链中渗入的荧光染料发出荧光信号，为荧光信号和 PCR 产物二者同步增加提供了有效保障，而荧光探针则可在探针的5’端、3’端分别标记出荧光报告基团、淬灭基团各一，二者彼此作用，形成能量传递结构。其中淬灭基团可有效抑制或者吸收来自 5’端荧光基团的荧光; 而一旦超出一定距离，则抑制效果消失，此时荧光信号随之增强，继而被监测系统检出并接收［5］。
我们通过观察检出荧光信号强弱程度，即可对 HPV扩增后获得的基因产物做出高效检测。本次研究结果表明，在检测高危型 HPV 方面，本次研究所用两种检测方法效能近似，差异并无统计学意义( P ＞ 0. 05) ; 而与湿疣以及宫颈炎相比，鳞状细胞癌、低度鳞状上皮内病变( LSIL) 以及高度鳞状上皮内病变( HSIL) 阳性检出率更高，差异具有统计学意义( P ＜0. 05) 。
综上所述，多重实时 PCR 检测方法易自动化，具有较好的重复性，检测快速简便，同时具有敏感性、特异性以及产率高的特点，DNA 扩增产物检测准确率高，适用监测高危型 HPV 持续感染以及大规模筛查，临床应可予以推广使用。
参考文献
［1］ 邹冰玉，浦海鹰，李丹，等． 210 例高危型人乳头瘤病毒感染检测及宫颈病变影响因素的探讨［J］． 实用妇产科杂志，2013，29( 12) : 938-940．
［2］ 胡仲翔，李德群，岳喜成，等． 乳腺癌中高危型人乳头瘤病毒感染及其与微血管密度的相关性［J］． 临床与实验病理学杂志，2014，30( 3) : 261-263．
［3］ 魏炜，宋韫韬，张宝云，等． 喉鳞状细胞癌患者人乳头瘤病毒感染的检测分析［J］． 中华实验和临床病毒学杂志，2013，27( 1) : 22-24．
［4］ 邢志艳，徐东艳，郝百连，等． 955 例妇科就诊妇女人乳头瘤病毒感染筛查结果分析［J］． 生殖医学杂志，2013，22( 12) :951-953．
［5］ 聂双双，丁显平，陈祖翼，等． 成都地区人乳头瘤病毒感染亚型、年龄分布、多重感染及相关趋势研究［J］． 国际检验医学杂志，2013，34( 22) : 3026-3028．
http://m.rjdtv.com/yixuelunwen/1794.html
